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（一）原理及適用范圍

將乳糖膽鹽選擇性培養(yǎng)基和TTC顯色劑加載在紙片上，經(jīng)培養(yǎng)后能夠在紙片上生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸的即為大腸菌群陽性，記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數(shù)，根據(jù)大腸菌群MPN表查出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)。食品大腸菌群檢驗紙片法與國標(biāo)法中的九管法相對應(yīng)，將原來幾步的試驗簡化為一步，時間由78h縮短為24h以內(nèi)，省去了制備培養(yǎng)基、消和培養(yǎng)器皿的清洗處理等大量輔助性工作，隨時可以打開包裝進(jìn)行抽樣檢測。執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物檢驗大腸菌群計數(shù)MPN計數(shù)法（GB 4789.3）。

適用于各類食品、飲料等樣品中大腸菌群的快速測定。

（二）操作方法

樣品處理：

按無菌操作稱取樣品25g（或25mL）放入含有225mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水）的取樣瓶或均質(zhì)杯中，經(jīng)充分振搖做成1：10的樣品勻液。樣品勻液的pH值應(yīng)在6.5～7.5之間，必要時用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸調(diào)節(jié)。用1mL滅菌吸管吸取1：10樣品勻液，注入含有9mL稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管制成1：100的樣品勻液。根據(jù)對樣品污染狀況的估計，按上述操作，一次制成10倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次，換一支1mL無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15min。

接種：

選取兩個稀釋度進(jìn)行接種，普通食品一般采用1：10和1：100這兩個稀釋度，飲料采用原液和1：10兩個稀釋度。本品每份由三片大紙片（接10mL，袋中二片疊放算作一大片），六片小紙片（接1mL）組成。

用滅菌吸管吸取10mL 1：10樣品勻液加到含有大紙片的塑料袋中（相當(dāng)于接樣品1g），吸透后平放，做三個重復(fù)。再用1mL滅菌吸管吸取1mL同一稀釋度的樣品勻液加到含有小紙片的塑料袋中（相當(dāng)于接樣品0.1g），做三個重復(fù)。再另取一支1mL滅菌吸管吸取1mL 1：100樣品勻液加到含有小紙片的塑料袋中（相當(dāng)于接樣品0.01g），做三個重復(fù)。

培養(yǎng)：

將接種好的紙片（可疊放）放入36℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15～24h。

（三）大腸菌群非?？赡軘?shù)（MPN）的報告。

若紙片變黃或在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點為大腸菌群陽性紙片。紙片保持紫藍(lán)色不變或在紫藍(lán)色背景上呈現(xiàn)紅色斑點，但周圍沒有黃色均為大腸菌群陰性紙片。

記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數(shù)，根據(jù)《食品飲料大腸菌群MPN表》查出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)。

如接種的第一個梯度為原液，應(yīng)將表上查出的結(jié)果除以10。

（四）注意事項

新的國家標(biāo)準(zhǔn)所用的單位改為每克（或毫升）檢樣中大腸菌群非?？赡軘?shù)，標(biāo)準(zhǔn)的接種量為0.333g（mL），MPN表也是由此而設(shè)計。而使用本品的標(biāo)準(zhǔn)接種量為3.33g（mL），大紙片接種10mL 1：10樣品勻液相當(dāng)于1g樣品，因而表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低10倍。飲料樣品的接種量為33.3mL，大紙片接種10mL樣品原液，表內(nèi)數(shù)字應(yīng)降低100倍。

（五）保存條件

本產(chǎn)品需存放在4℃～10℃冰箱中，保質(zhì)期為一年，鋁箔袋打開后,未用完的紙片要放回鋁箔袋中封好，放到冰箱中，一個月內(nèi)用完。在高濕度的環(huán)境中可能出現(xiàn)冷凝水，非常好在拆封前將整包回溫至室溫。